一、基本信息

1. 产品编号：HY-A384

2. 产品名称：NCI-H929-NLUC-puro 人骨髓瘤细胞 (NLUC标记)

3. 英文名称：Human Myeloma Cell Line (NanoLuc Luciferase Labeled)

4. 种属来源：人

5. 组织来源：胸腔积液

6. 疾病背景：多发性骨髓瘤

7. 细胞类型：淋巴母细胞样

8. 生长特性：悬浮生长

9. 细胞形态：淋巴母细胞样

10. 标记基因：稳定表达NanoLuc 荧光素酶 (NLUC)

11. 筛选标记：嘌呤霉素 (Puromycin) 抗性

12. 细胞代数：10代以内

13. 生物安全等级：1级

14. 产品规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管包装

15. 支原体检测：阴性

16. 专用培养基：NCI-H929-NLUC-puro细胞专用培养基

17. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳

18. 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

19. 发货方式：复苏发货（T25瓶，免运输费）

                        冻存发货（冻存管，需加干冰运输费）

20. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的悬浮淋巴母细胞样形态，细胞呈圆形，单个或成小团生长。

2. 遗传背景：基于人多发性骨髓瘤细胞系NCI-H929构建。

3. 工程改造：通过基因工程手段（如慢病毒转导），稳定整合了NanoLuc荧光素酶 (NLUC) 基因和嘌呤霉素抗性 (puro) 基因，用于筛选和维持。

4. 报告基因优势：NanoLuc荧光素酶是一种新型、小型、高亮度的报告酶，比传统的萤火虫荧光素酶更灵敏、信号更强、背景更低，特别适合高灵敏度检测和活体成像。

5. 功能验证：已进行荧光素酶活性检测，NLUC表达活性高且稳定。

三、培养条件

1. 专用培养基：NCI-H929-NLUC-puro细胞专用培养基（含必要生长因子及嘌呤霉素筛选压力）

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳

3. 生长模式：悬浮生长

四、产品应用

1. 高灵敏度活体成像：凭借NanoLuc荧光素酶的超高亮度，是进行超灵敏小动物活体成像的理想工具，尤其适用于检测微小转移灶、低表达肿瘤或进行长时间动态监测。

2. 体外高通量药物筛选：用于评估化疗药物、蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、单抗药物及新型靶向疗法对多发性骨髓瘤细胞的杀伤效果，通过检测NLUC活性变化精确定量细胞活力。

3. 多发性骨髓瘤机制研究：用于研究骨髓瘤细胞的增殖、凋亡、耐药、与骨髓微环境相互作用及信号通路调控。

4. 报告基因阳性对照：作为NanoLuc报告基因系统检测的稳定、高活性阳性对照。

5. 治疗性抗体或细胞疗法评估：可用于评估CAR-T细胞、双特异性抗体等免疫疗法对骨髓瘤细胞的体外杀伤效应。

五、产品优势

1. 超高灵敏度报告系统：采用的NanoLuc荧光素酶信号强度远超传统荧光素酶，检测灵敏度更高，背景更低，特别适合微弱信号的检测。

2. 即用型工具细胞：已成功构建并验证，用户无需自行构建稳转株，节省大量时间和成本。

3. 悬浮细胞操作便捷：作为悬浮细胞，传代操作相对简便，更适合大规模培养和高通量实验。

4. 体内外应用无缝衔接：完美适配从体外细胞水平药效评估到体内动物模型药效验证的全流程研究。

六、培养方法

1. 收货与复苏处理：

（1）T25瓶（复苏发货）：收到细胞后，用75%酒精擦拭细胞瓶表面。将T25瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。静置后，在显微镜下观察细胞密度和状态，并根据密度决定后续操作（详见注意事项）。

（2）冻存管（冻存发货）：收到细胞后，建议尽早复苏。若不立即复苏，可直接放入-80℃冰箱（不超过一周）或液氮罐保存。复苏时，将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。加入4 mL专用培养基混合均匀。1000 rpm离心3分钟，弃去上清液。加入1-2 mL新鲜专用培养基重悬细胞。将细胞悬液加入含适量专用培养基的T25瓶或6cm培养皿中，置于培养箱培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2. 传代操作（悬浮细胞）：

时机判断：当细胞密度达到80%-90%，或培养基颜色明显变黄时，即可进行传代。

细胞收集：方法一（完全换液传代）：将培养瓶直立放置至少半小时，使细胞沉降到瓶底。小心收集全部细胞悬液至离心管中，必要时可用少量PBS润洗瓶底并收集。1000 rpm离心3-5分钟，弃去上清。

                  方法二（半量换液传代，适用于状态良好、密度适中的细胞）：直立培养瓶使细胞沉降，小心弃去约一半旧培养基，将剩余细胞悬液轻轻吹匀。

重悬与接种：加入1-2mL新鲜专用培养基重悬细胞。根据细胞生长速度，按1:2至1:4的比例，将细胞悬液分装到含新鲜专用培养基的新培养瓶/皿中。

培养：置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，定期轻轻摇晃或混匀细胞悬液。

3. 冻存操作：收集细胞：按“完全换液传代”的方法收集处于对数生长期、状态良好的细胞。

                      洗涤：1000 rpm离心4分钟，弃上清，用PBS清洗一遍，再次离心弃尽PBS。

                      计数与配制冻存液：进行细胞计数。根据细胞数量加入预冷的无血清细胞冻存液，使细胞密度达到5×10⁶ ~ 1×10⁷ cells/mL，轻轻混匀。

                      分装：将细胞悬液分装至冻存管，每管1 mL，并做好清晰标识。

                      程序冻存：将冻存管放入程序降温盒或直接放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮中长期储存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。