一、基本信息

1. 产品编号：HY-A211

2. 产品名称：T98G-FLUC-puro（人胶质母细胞瘤-荧光素酶标记）

3. 英文名称：Human Glioblastoma Cell Line (Firefly Luciferase Labeled)

4. 细胞别称：T98G-FLUC-PURO

5. 种属来源：人

6. 组织来源：脑

7. 疾病背景：胶质母细胞瘤

8. 细胞类型：上皮细胞样

9. 生长特性：贴壁生长

10. 细胞形态：上皮细胞样

11. 标记基因：稳定表达萤火虫荧光素酶 (Firefly Luciferase, FLUC)

12. 筛选标记：嘌呤霉素 (Puromycin) 抗性

13. 筛选浓度：建议维持培养浓度为 0.5 µg/mL

14. 生物安全等级：1级

15. 产品规格：1x10⁶ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管包装

16. 支原体检测：阴性

17. 保藏机构：ATCC (CRL-1690); ECACC (92090213); JCRB (IFO50303, JCRB9041); KCLB (21690); RCB (RCB1954)

18. 运输方式：复苏发货（T25瓶，免运输费）

                        冻存发货（冻存管，需加干冰运输费）

19. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：贴壁生长，呈上皮细胞样形态。

2. 遗传背景：基于人胶质母细胞瘤细胞系T98G构建。

3. 工程改造：通过慢病毒转染的方式，稳定整合了萤火虫荧光素酶 (FLUC) 基因和嘌呤霉素抗性 (puro) 基因。

4. 稳定性：细胞株性状稳定，荧光素酶表达持续，常规培养时不需要添加抗生素维持（但建议使用0.5 µg/mL嘌呤霉素维持筛选压力，以防标记丢失）。

5. 功能验证：已进行荧光素酶活性检测，活性明确，适用于生物发光成像。

三、培养条件

1. 基础培养基：MEM

2. 完全培养基：MEM + 10% 胎牛血清 (FBS) + 1% 青霉素-链霉素双抗 (PS) + 0.5 µg/mL 嘌呤霉素 (puro)

3. 培养环境：温度：37℃

                      气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳

4. 生长模式：贴壁生长

四、产品应用

1. 活体动物成像：是进行小动物活体成像的理想工具。将细胞接种到小鼠体内（如皮下、原位脑瘤模型），通过腹腔注射荧光素底物（如D-荧光素），即可无创、实时、定量地监测肿瘤的生长、转移以及对治疗的反应。

2. 体外药物筛选与药效评估：用于高通量筛选或评估化疗药物、靶向药物、放疗等对胶质母细胞瘤细胞的杀伤效果，通过检测荧光素酶活性的变化来定量细胞活力。

3. 治疗机制研究：结合报告基因特性，研究药物诱导的细胞凋亡、自噬、周期阻滞等生物学过程。

4. 阳性对照：作为萤火虫荧光素酶活性检测实验的稳定阳性对照细胞。

5. 胶质瘤基础研究：用于研究胶质母细胞瘤的侵袭、血管生成、代谢及耐药机制。

五、产品优势

1. 即用型报告基因细胞：已成功构建并验证，节省用户自行构建稳转细胞系的时间和成本。

2. 高灵敏度与定量性：荧光素酶报告基因系统灵敏度高，线性范围宽，便于精确定量。

3. 体内外应用兼容：无缝衔接体外细胞实验和在体动物实验，实现从分子机制到整体药效的连贯研究。

4. 稳定性好：荧光素酶表达稳定，传代多次后仍能保持高活性，实验结果重复性好。

六、培养方法

1. 收货与复苏处理：

（1）T25瓶（复苏发货）：收到细胞后，观察细胞瓶是否完好，用75%酒精消毒瓶壁。将T25瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中静置2-4小时，以稳定细胞状态。之后可更换为含0.5 µg/mL嘌呤霉素的新鲜完全培养基，继续培养。

（2）冻存管（冻存发货）：收到细胞后，应立即转入液氮冻存或直接复苏。复苏时，将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。加入4 mL完全培养基（不含嘌呤霉素）混合均匀。1000 rpm离心3分钟，弃去上清。加入1-2 mL新鲜完全培养基（含0.5 µg/mL嘌呤霉素）重悬细胞。将细胞悬液接种至含适量含药培养基的T25瓶或10cm培养皿中，置于培养箱培养过夜。第二天更换新鲜含药培养基并检查细胞密度。

2. 传代操作（以T25瓶为例）：时机判断：当细胞密度达到80%-90% 时进行传代。

                                                洗涤：弃去旧培养上清，用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗细胞1-2次。

                                                消化：加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA），使之浸润所有细胞，然后弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化约1分钟。

                                                 观察与终止：在显微镜下观察，待大部分细胞变圆并脱落时，迅速拿回操作台，轻敲瓶壁使细胞脱落，加入少量完全培养基（可暂不含嘌呤霉素）终止消化。

                                                 收集细胞：将细胞悬液转移至无菌离心管，1000 rpm离心4分钟，弃去上清。

                                                 重悬与接种：加入1-2 mL新鲜完全培养基（含0.5 µg/mL嘌呤霉素）重悬细胞，按1:2的比例接种到含8 mL含药培养基的新培养瓶中。

                                                 培养：置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。

3. 冻存操作：收集细胞：按传代方法收集处于良好生长状态的细胞。

                      计数与重悬：离心后弃上清，用PBS清洗一遍，弃尽PBS。用1 mL血清或不含抗生素的完全培养基重悬细胞并进行计数。

                      配制冻存液：根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度达到5x10⁶ ~ 1x10⁷ cells/mL，轻轻混匀。（冻存液通常不含嘌呤霉素）

                      分装：将细胞悬液分装至冻存管，每管1 mL，并做好标识。

                      冻存：将冻存管放入程序降温盒或直接放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮中长期储存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。