一、产品详情

1. 货号：HY-CSC-270
2. 产品名称： NCI-H1650细胞专用培养基
3. 产品形态： 液体
4. PH范围： 7.2-7.4
5. 产品规格： 500mL
6. 培养基成分： RPMI-1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX-I + 1% Sodium Pyruvate + 1% 青霉素-链霉素双抗
7. 细菌检测： 阴性
8. 真菌检测： 阴性
9. 支原体检测： 阴性
10. 细胞生长实验： 细胞生长良好，形态正常
11. 内毒素含量： ≤10 EU/mL
12. 产品简介： NCI-H1650细胞专用培养基已包含 NCI-H1650细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于NCI-H1650细胞的培养。
13. 储存条件： 2℃-8℃，避光储存
14. 运输条件： 冰袋冷藏运输
15. 有效期： 3个月
16. 免责声明： 本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责。

二、产品介绍

NCI-H1650细胞系是一种人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系，来源于一位肺腺癌患者的淋巴结转移灶。该细胞系在分子特征上具有重要的临床意义：它携带表皮生长因子受体（EGFR）基因第19号外显子缺失突变（E746-A750缺失），属于EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI，如吉非替尼、厄洛替尼）的敏感型细胞模型，但同时不表达或低表达间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合蛋白和c-MET扩增。NCI-H1650细胞是研究EGFR突变型肺癌生物学特性、EGFR-TKI药物作用机制、原发性及获得性耐药（特别是T790M突变获得前的早期耐药机制）的核心体外模型之一。其核心应用包括：作为研究EGFR第19号外显子缺失突变驱动肺癌生长、增殖和生存信号通路的经典模型；评估第一代和第二代EGFR-TKI（如吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼）的体外疗效、细胞周期阻滞和诱导凋亡的作用机制；研究EGFR-TKI原发性耐药和早期获得性耐药的分子机制，如通过上皮-间质转化（EMT）、旁路信号激活（如c-MET、AXL、IGF-1R）、表观遗传改变或肿瘤微环境介导的适应性抵抗等；探索克服耐药的联合治疗策略，如EGFR-TKI联合化疗、MEK抑制剂、免疫检查点抑制剂或其他靶向药物；进行药物敏感性筛选，预测患者对特定EGFR-TKI的治疗反应；研究EMT过程在肺癌侵袭、转移及EGFR-TKI耐药中的作用；评估肿瘤干细胞特性在治疗抵抗中的角色；以及作为建立EGFR突变型肺癌异种移植瘤模型的细胞来源。NCI-H1650细胞因其明确的EGFR活化突变背景及其在肺癌靶向治疗研究中的广泛应用，成为非小细胞肺癌基础研究与转化医学领域的关键工具。

NCI-H1650细胞专用培养基由Cell Factory专业研发团队充分考虑该细胞系作为人非小细胞肺癌细胞系的稳定增殖与药物研究需求而进行科学优化。NCI-H1650细胞是一种贴壁生长、呈上皮样或部分梭形的肿瘤细胞，其体外培养需要提供能支持其稳定增殖并维持其EGFR信号通路活性及相关细胞特性的适宜环境。本产品经过精心配比，以广泛适用于多种造血和实体瘤细胞的RPMI-1640为基础培养基，并添加了能有效支持NCI-H1650细胞贴壁和增殖的关键优化成分：即提供必需生长因子、激素和附着因子的优质胎牛血清（FBS，终浓度10%）；稳定、不易降解的L-谷氨酰胺替代物GlutaMAX-I（终浓度1%），为快速增殖的肿瘤细胞提供持续的能量和氮源支持；丙酮酸钠（Sodium Pyruvate，终浓度1%），作为额外的能量底物和碳源，有助于维持细胞代谢稳态；以及常规浓度的青霉素-链霉素双抗（PS，终浓度1%）以有效预防细菌污染。该“RPMI-1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX-I + 1%丙酮酸钠 + 1% 双抗”的配方是针对NCI-H1650等肺癌细胞系培养的优化、可靠且广泛使用的方案。经过长期的时间检验与严格的批次验证，本培养基能够稳定支持NCI-H1650细胞以典型的形态良好贴壁生长，增殖活力旺盛，为后续的EGFR-TKI药物敏感性测试、耐药机制探索、信号通路分析或基因表达谱研究提供状态可靠且一致的细胞来源。这保证了实验结果的准确性和可重复性，特别是在进行涉及药物长期处理、细胞凋亡检测或分子机制探索等精细实验时至关重要。它为EGFR突变型非小细胞肺癌研究及靶向药物开发领域，提供了一个稳定、高效、即用且经过优化的专用培养解决方案。

三、产品主要成分

本产品为即用型完全培养基，其配方经过优化，可直接用于细胞培养，无需用户自行添加任何成分。其主要成分如下：
1. 基础培养基： RPMI-1640培养基（Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium），占比约87%。
2. 血清： 优质胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS），终浓度为10%。
3. 能量代谢添加剂：
GlutaMAX-I（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽），终浓度为1%，作为L-谷氨酰胺的稳定来源。
丙酮酸钠（Sodium Pyruvate），终浓度为1%，作为补充能量底物。
4. 抗生素： 青霉素-链霉素双抗溶液（Penicillin-Streptomycin, PS），常规工作浓度，占比约1%。
注：以上所有组分均已按精确比例在严格的无菌条件下预先混合均匀，开瓶即可使用。该配方旨在为贴壁生长的NCI-H1650 EGFR突变型非小细胞肺癌细胞提供全面、充足且代谢支持优化的营养环境，并有效预防细菌污染，以满足其常规培养和高通量实验研究的需求。

四、运输和保存方法

1. 运输条件：为确保产品在运输过程中的稳定性和有效性，所有产品均采用专业的冷链运输方式（冰袋冷藏运输）。
2. 保存条件与保质期：常规冷藏： 2℃～8℃避光保存，保质期为3个月。
                                     冷冻保存： -20℃避光保存，保质期可延长至12个月。由于含有GlutaMAX-I（比普通谷氨酰胺更稳定）和丙酮酸钠，适当冻存对产品性能影响较小，但仍建议避免反复冻融。
3. 使用建议：

收货处理：收到产品后，请立即检查包装是否完好，并尽快放入推荐的保存温度（2-8℃或-20℃）下，避免长时间在常温或较高温度环境中保存。

储存管理：可根据实验计划选择保存方式。建议避免反复冻融以保持血清中生长因子活性及添加剂成分的稳定。若选择-20℃保存，可根据日常实验用量进行分装，分装后也需严格避光保存。

使用前准备：使用前，请将培养基在37℃水浴中预热至适宜温度（若为冷冻保存，需先完全解冻）。解冻后请轻轻颠倒混匀。请注意，冻融后可能会有少量絮状物析出，此为正常现象，不影响产品正常使用。

无菌操作：虽然本产品已含有抗生素，但所有操作仍应在生物安全柜或超净工作台内进行，并严格遵守无菌操作规程，以最大程度降低污染风险。

特殊实验需求：对于EGFR-TKI药物处理实验，需注意药物溶解、储存条件及处理浓度和时间。血清批次可能对某些小分子TKI药物的活性有潜在影响，建议进行预实验。对于无血清的药物处理或信号检测实验，可能需要更换为无血清饥饿培养基处理一段时间。

培养条件：NCI-H1650细胞使用本产品时，应在含5% CO2的37℃恒温培养箱中培养。该细胞为贴壁生长，需定期在显微镜下观察其形态和融合度。

细胞传代：当细胞融合度达到80-90%时，即可进行传代。使用常规的胰蛋白酶/EDTA消化法进行消化。消化后，用本专用培养基（或含血清的培养基）完全中和胰酶，离心收集细胞，用新鲜预热的本专用培养基重悬，并按适当比例（通常1:3至1:5）接种到新的培养容器中。

换液频率：根据细胞生长速度，通常每2-3天更换一次新鲜培养基。

EGFR-TKI敏感性测试（MTT/CCK-8、克隆形成、EdU掺入）：是评估吉非替尼、厄洛替尼等药物对NCI-H1650细胞生长抑制活性的核心方法。

细胞凋亡与周期分析：通过流式细胞术（Annexin V/PI染色）和细胞周期检测，分析EGFR-TKI诱导的细胞死亡和周期阻滞情况。

信号通路研究：通过Western Blot、免疫荧光等方法检测EGFR及其下游的PI3K/AKT和MAPK/ERK通路在药物处理前后的磷酸化水平，是机制研究的常规手段。

耐药机制研究：通过长期低剂量EGFR-TKI暴露诱导耐药细胞株，或通过基因编辑技术引入耐药突变（如T790M），用于研究获得性耐药的分子机制。

EMT研究：通过形态学观察、分子标志物（如E-cadherin, Vimentin）检测，评估细胞在药物压力下或耐药后是否发生EMT。

联合用药研究：评估EGFR-TKI与其他类药物（如化疗药、MEK抑制剂、免疫调节剂等）的协同或拮抗作用。

体内模型准备：可用于准备细胞悬液，以建立EGFR突变型肺癌皮下移植瘤模型，用于体内药效评价。

开封后保存：产品开封后，若需再次储存，务必在瓶口封上封口膜或拧紧瓶盖以避免污染，并建议尽快使用完毕。

五、质量控制

为确保每一批次产品的质量稳定可靠，我们执行了全面的质量控制体系：
1. 污染物检测：每批次产品均经过严格的微生物污染检测，确保细菌、真菌及支原体等污染物检测结果为阴性，杜绝微生物污染风险。这对于维持NCI-H1650这一重要的EGFR突变型肺癌研究模型的纯净性，以及确保涉及长期药物处理、信号通路分析等关键研究结果的可靠性至关重要。
2. 理化指标检测：产品经过严格的理化指标检测，确保澄清度、pH值（7.2-7.4）、渗透压、内毒素含量（≤10 EU/mL）等关键参数符合高质量细胞培养的标准。
3. 细胞功能验证：每批次产品均使用标准的NCI-H1650细胞进行生长验证试验。验证结果表明，细胞在本专用培养基中贴壁良好，增殖活力稳定，细胞形态典型，确保了产品能够有效支持该EGFR突变型肺癌细胞的稳定生长，并保证了卓越的批次间稳定性。这对于需要细胞保持一致的EGFR突变状态、增殖速率以及对EGFR-TKI药物的敏感性以进行可靠的药理学或机制研究至关重要，是保证肺癌靶向治疗研究实验结果准确性和可比性的基础。

六、注意事项

1. 储存与时效：请务必在推荐的温度条件（2℃～8℃）下避光保存产品，并在标注的有效期内使用。所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用。

2. 外观检查：使用前请观察培养基是否澄清。培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响产品正常使用。如发现严重浑浊、大量异常沉淀或颜色异常，请勿使用。

3. 污染防控：虽然本产品已含有抗生素，但为保持产品的最佳使用效果，仍不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。同时，严格的灭菌操作仍是避免污染的关键。开封后重新保存时，务必采取密封措施以避免污染。

4. 即用型说明：本产品含有血清（10% FBS）、能量添加剂（GlutaMAX-I、丙酮酸钠）和抗生素（1% 双抗），可以直接使用。如无特别需要，不需要额外添加任何成分。

5. 细胞特性：NCI-H1650细胞为贴壁生长的EGFR突变型非小细胞肺癌细胞系，对EGFR-TKI敏感。建议在较低代次时冻存足量细胞以备后续使用，并定期检测其EGFR突变状态以确保模型的一致性。

6. 药物处理实验：进行EGFR-TKI药物实验时，需注意药物溶解（通常使用DMSO）、储存条件（-20℃或-80℃避光）及处理浓度和时间。需设置DMSO溶剂对照组。

7. 生物安全：NCI-H1650细胞来源于人肿瘤组织，属于潜在生物危害材料，具有致瘤性。操作时应遵守实验室生物安全规范，在生物安全柜内进行，所有接触过细胞的器皿和废弃物应按照生物危害废物标准进行处理，操作者需做好个人防护。

8. 交叉污染：需特别注意避免与其他细胞系（尤其是其他肺癌细胞系）发生交叉污染。

9. 用途限制：NCI-H1650细胞专用培养基仅供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。严禁用于人类或动物的临床诊断、治疗、药物生产、家庭使用或任何其他医疗目的。