一、产品介绍

1. 产品编号：HY-CSC-182

2. 产品名称：T98G-FLUC-puro细胞专用培养基

3. 规格：500mL

T98G-FLUC-puro细胞系是以经典人胶质母细胞瘤（Glioblastoma Multiforme，GBM）细胞系T98G为亲本构建的荧光素酶报告基因细胞系。T98G细胞源自61岁男性患者脑部恶性胶质母细胞瘤组织（ATCC CRL-1690），是神经肿瘤学研究中应用最为广泛的胶质瘤细胞模型之一。该细胞系具有典型的肿瘤干细胞特性，呈贴壁生长，携带TP53突变、PTEN缺失，并高表达MGMT（O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶），对替莫唑胺（Temozolomide，TMZ）表现出显著耐药性，同时具有放射抵抗性。T98G-FLUC-puro细胞系通过慢病毒载体转染技术，在T98G亲本细胞中稳定整合了萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase，FLUC）报告基因和嘌呤霉素抗性基因（PuroR），经嘌呤霉素阳性克隆筛选及多轮亚克隆扩增获得。该细胞系能够组成性高表达萤火虫荧光素酶，在体外和体内均可通过添加D-荧光素底物产生高强度、高稳定性的生物发光信号，是开展定量肿瘤学研究的理想工具细胞。其核心应用领域包括：活体成像研究（In Vivo Imaging），利用生物发光成像系统（BLI）实时无创监测肿瘤细胞在活体内的生长、侵袭和转移动态；高通量药物筛选（HTS），基于FLUC信号强度定量评估抗肿瘤化合物对胶质母细胞瘤增殖的抑制效应；小鼠异种移植瘤模型（CDX），皮下或原位接种构建胶质母细胞瘤荷瘤小鼠模型用于药效学评价；抗胶质瘤药物研发，靶向药物、化疗药物及纳米载药系统的体外/体内疗效评估；生物发光定量监测，精确量化肿瘤负荷、生长曲线和治疗响应；放化疗敏感性评估，利用T98G固有的放射抵抗和替莫唑胺耐药特性研究放化疗增敏策略；肿瘤微环境研究，探索肿瘤-基质相互作用及免疫调控机制；纳米药物递送系统评估，评价血脑屏障穿透性纳米载体在胶质瘤靶向治疗中的效果。嘌呤霉素（Puromycin）是一种氨基核苷类抗生素，通过模拟氨酰-tRNA分子导致翻译提前终止从而抑制蛋白质合成。T98G-FLUC-puro细胞携带嘌呤霉素抗性基因（PuroR），本培养基中含有0.5 ug/mL嘌呤霉素，可持续施加筛选压力，有效清除报告基因表达沉默或质粒丢失的非抗性细胞，确保FLUC荧光素酶报告基因在长期传代培养过程中的稳定高表达。严禁使用不含Puromycin的普通培养基进行常规培养，否则将导致报告基因表达逐渐丢失，影响实验数据的可靠性和可重复性。T98G-FLUC-puro细胞专用培养基由Cell Factory专业研发团队根据该细胞的营养需求和嘌呤霉素耐受特性进行科学优化，经过严格的理化指标检测和细胞功能验证，确保细胞贴壁良好、增殖稳定、FLUC表达水平均一。本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

二、产品主要成分

本产品为即用型完全筛选培养基，其配方经过优化，可直接用于细胞培养与筛选维持，无需用户自行配制。其主要成分如下：

1. 基础培养基：MEM（Minimum Essential Medium）基础培养基。

2. 血清：优质胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS），终浓度为10%。

3. 抗生素：青霉素-链霉素双抗溶液（Penicillin-Streptomycin），终浓度为1%。

4. 筛选抗生素：嘌呤霉素（Puromycin），终浓度为0.5 ug/mL。

注：以上所有组分，特别是嘌呤霉素，均已按精确比例在严格的无菌条件下预先混合均匀，开瓶即可使用。无需额外添加任何成分，也无需自行配制筛选抗生素。该配方旨在为T98G-FLUC-puro细胞提供全面的营养支持、抗菌保护以及维持报告基因稳定性的持续筛选压力。

三、运输和保存方法

1. 运输条件：为确保产品在运输过程中的稳定性和有效性，特别是其中嘌呤霉素的稳定性，所有产品均采用专业的冷链运输方式。

2. 保存条件与保质期：

（1）常规冷藏：2℃～8℃避光保存，保质期为3个月。由于含有筛选抗生素，建议在此条件下保存并在有效期内使用，以确保筛选压力的有效性。

（2）冷冻保存：-20℃避光保存，保质期为12个月。需注意反复冻融可能影响抗生素活性，建议根据实验用量分装冻存。

3. 使用建议：

（1）收货处理：收到产品后，请立即检查包装是否完好，并尽快放入2-8℃冰箱避光保存。

（2）开封后保存：拧紧瓶盖，短期内可继续存放于2-8℃，建议在2-4周内使用完毕，以减少污染风险并保持筛选抗生素的最佳效力。

（3）使用前准备：使用前，请将培养基在37℃水浴中预热至适宜温度（避免剧烈摇晃）。请注意，冻融后可能会有少量絮状物析出，此为正常现象，不影响产品正常使用。

（4）无菌操作：所有操作应在生物安全柜或超净工作台内进行，并严格遵守无菌操作规程。

（5）筛选压力维持：本产品已包含0.5 ug/mL Puromycin，可维持对T98G-FLUC-puro细胞的筛选压力。请务必使用本专用培养基进行常规培养和传代，以持续清除可能出现的低表达或无表达细胞，确保报告基因表达的均一性和稳定性。若更换为不含Puromycin的普通培养基，可能导致抗性基因丢失或报告基因表达沉默。

（6）培养条件：T98G-FLUC-puro细胞使用本产品时，应在含5% CO2的37℃恒温培养箱中培养。该细胞为贴壁生长。

（7）细胞传代：当细胞融合度达到80-90%时，即可进行传代。使用常规的胰蛋白酶/EDTA消化法进行消化。消化后，用本专用培养基（含Puromycin）完全中和胰酶，离心收集细胞，用新鲜预热的本专用培养基重悬，并按适当比例（通常为1:3至1:5）接种到新的培养容器中。

（8）换液频率：根据细胞生长速度，通常每2-3天更换一次新鲜的本专用培养基。

（9）开封后保存：产品开封后，若需再次储存，务必采取严格密封措施（如封口膜）以避免污染。

四、质量控制

1. 为确保每一批次产品的质量稳定可靠，我们执行了全面的质量控制体系：

2. 污染物检测：每批次产品均经过严格的微生物污染检测，确保细菌、真菌及支原体等污染物检测结果为阴性，杜绝微生物污染风险。

3. 理化指标检测：产品经过严格的理化指标检测，确保pH值（7.2-7.4）、渗透压（280-320 mOsm/kg）、内毒素含量（<=10 EU/mL）等关键参数符合高质量细胞培养的标准。

4. 关键组分效价检测：对配方中的关键组分嘌呤霉素（Puromycin）的效价进行准确标定与生物活性验证，采用高效液相色谱（HPLC）定量分析确保终浓度精确为0.5 ug/mL，采用野生型（Puromycin敏感）细胞进行杀伤曲线验证确认筛选压力有效性。

5. 细胞功能验证：每批次产品均使用标准的T98G-FLUC-puro细胞进行生长与功能验证试验。验证结果表明，细胞在本专用培养基中贴壁良好，接种后4-6小时完成贴壁且形态正常，增殖活力正常，通过荧光素酶活性检测确认FLUC报告基因表达稳定、信号强度高且表达均一，批次间变异系数（CV）<10%。这确保了产品在支持细胞生长的同时，能有效维持报告基因系统的稳定性，保证了卓越的批次间一致性。

五、注意事项

1. 产品收到后，请检查包装是否完好，若出现破损漏液浑浊等现象，请拍照留存并及时联系Cell Factory售后；

2. 请务必在推荐的温度条件（2℃～8℃）下避光保存产品，并在标注的有效期内使用。超出保质期，必须放弃使用。特别注意，抗生素活性可能随时间下降，影响筛选效果；

3. 始终使用含Puromycin的专用培养基培养T98G-FLUC-puro细胞。若长期使用不含Puromycin的培养基，将导致荧光素酶报告基因表达沉默或质粒丢失，造成不可逆的实验损失；

4. 检查产品无误后，请仔细阅读产品说明书。请不要将该产品长时间的储存在室温或较高的温度中；请不要使用超出保质期的产品；培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响产品正常使用；

5. 本产品含有血清（10% FBS）、常规抗生素（1%双抗）和筛选抗生素（0.5 ug/mL Puromycin），是即用型完全筛选培养基。如无特别说明，无需额外添加任何成分；

6. 本产品仅供科研使用，不可应用于临床等其他方面。细胞来源于人恶性肿瘤组织并经过基因改造，请在二级生物安全柜（BSL-2）内操作。若操作不当，如有接触该产品，请立即使用大量的清水冲洗即可；

7. 建议每5-10代进行一次荧光素酶活性检测，确认报告基因表达水平和信号强度稳定。