一、基本信息

1. 产品编号：HY-J188

2. 产品名称：大鼠原代小肠隐窝上皮细胞

3. 英文名称：Rat Small Intestinal Crypt Epithelial Cells

4. 种属来源：大鼠

5. 组织来源：小肠组织（主要分离自隐窝区域）

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：上皮细胞样，呈典型的“铺路石”状或不规则多边形

9. 传代能力：传代能力有限，可传1-2代

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 专用培养基：大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基

14. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递（包邮）

18. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的小肠上皮细胞形态。细胞呈铺路石状或不规则多边形，边界清晰，贴壁生长时排列紧密，形成单层上皮样结构。细胞核较大，呈圆形或卵圆形。

2. 来源与特性：采用先机械分离、后胶原酶消化法，并结合上皮细胞专用培养基进行培养筛选制备，有效富集来源于小肠隐窝区域的上皮细胞。

3. 分子与功能特性：

上皮细胞标志：高表达广谱角蛋白（PCK），是鉴定上皮细胞来源的关键标志物。

隐窝细胞特性：来源于小肠隐窝，该区域是肠道干细胞和祖细胞的富集区。因此，该细胞群体可能包含具有增殖潜能的肠道干细胞或祖细胞，以及分化中的隐窝上皮细胞，是研究肠道上皮细胞更新、分化与损伤修复的理想起点模型。

屏障与吸收功能基础：作为构成肠黏膜物理屏障和吸收功能的主体细胞，可用于研究肠道屏障完整性、营养物质吸收、紧密连接蛋白（如ZO-1, Occludin）功能及相关信号通路。

响应肠道微环境：对肠道激素、生长因子、炎症因子及菌群代谢产物等具有响应能力，可用于模拟和研究肠道微环境对上皮细胞功能的影响。

三、培养条件

1. 专用培养基：大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

3. 换液频率：每2-3天更换一次新鲜完全培养基，以维持营养和清除代谢废物。

四、产品应用

1. 肠道上皮生物学研究：研究小肠上皮细胞的增殖、分化、迁移及凋亡过程，探索肠道干细胞维持与分化的调控机制（如Wnt/β-catenin, Notch信号通路）。

2. 肠道屏障功能与疾病模型：用于建立体外肠道屏障模型，研究炎症性肠病（IBD）、肠易激综合征（IBS）等疾病中肠道屏障功能受损的机制，并评估保护肠黏膜屏障的药物或功能性食品成分。

3. 肠道感染与免疫研究：研究肠道病原体（如细菌、病毒）与小肠隐窝上皮细胞的相互作用，包括黏附、侵袭及诱导的炎症反应和细胞损伤。

4. 营养物质吸收与转运研究：作为研究葡萄糖、氨基酸、脂肪酸等营养物质在小肠上皮细胞层面吸收与转运机制的细胞模型。

5. 药物肠道毒性评价：用于评估药物、毒素或环境污染物对肠道上皮细胞的直接毒性作用，如对细胞活力、屏障功能和紧密连接结构的影响。

五、产品优势

1. 高纯度富集：采用优化的机械与酶学联合分离法，并结合选择性培养基进行培养，有效富集了来源于隐窝区域的上皮细胞，PCK鉴定纯度 > 90%，确保了细胞群体的特异性。

2. 生理相关性高：作为原代细胞，直接分离自小肠组织，保留了体内小肠上皮细胞的关键形态、标志物表达及部分功能特性，比永生化细胞系更能反映生理状态。

3. 研究价值独特：细胞来源于富含干细胞/祖细胞的隐窝区域，为研究肠道上皮再生、损伤修复及干细胞生物学提供了宝贵的原代细胞资源。

4. 配套体系专业：提供专门为维持大鼠小肠隐窝上皮细胞生长而设计的完全培养基，为细胞的体外存活与功能维持提供了保障。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查细胞瓶是否完好，培养基有无漏液、浑浊。

稳定细胞：用75%酒精消毒T25瓶身，拆下封口膜，将细胞瓶放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复贴壁和稳定状态。

首次观察：静置后，在显微镜下观察细胞形态（应为铺路石状）、贴壁情况及密度，并拍照记录。

2. 传代操作（建议尽快实验，如需传代请谨慎操作）：

时机判断：当细胞密度达到80%-90% 融合时，可考虑进行传代。请注意，该细胞传代能力弱，强烈建议收到后直接用于实验。

洗涤：小心吸弃旧培养基，用预温的无菌PBS轻轻清洗细胞一次。

消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使其覆盖瓶底。
b. 立即吸出大部分消化液，仅留一薄层覆盖细胞表面（关键步骤，防止过度消化）。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

观察与终止：在倒置显微镜下密切观察，待大部分细胞间隙增大、形态变圆时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

轻柔吹打：用吸管极其轻柔地吹打瓶底，使细胞脱落。避免剧烈吹打造成细胞损伤。

分瓶接种：将细胞悬液收集至离心管，短暂离心（如200×g，5分钟）后弃上清，用新鲜培养基重悬。按1:2的传代比例接种到新的T25培养瓶中。

补充培养基：向每个新瓶中加入新鲜的专用完全培养基至约5mL。

培养：将培养瓶放回培养箱。待细胞贴壁后，每2-3天换液一次。

3. 冻存操作（建议直接使用，如必须冻存请谨慎）：

细胞选择：尽量使用原代细胞或第一代细胞进行冻存，状态需良好。

消化收集：按上述方法消化并收集细胞，离心后弃上清。

冻存液配制：使用配套的无血清细胞冻存液或含DMSO的冻存液（如90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，调整密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

分装与冻存：分装至冻存管，标记清楚。采用程序降温法冻存，最终保存于液氮中。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。