一、基本信息

1. 产品编号：HY-J285

2. 产品名称：大鼠髁突软骨细胞

3. 英文名称：Rat Condylar Chondrocytes

4. 种属来源：大鼠

5. 组织来源：髁突软骨（下颌骨髁突）

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：典型的软骨细胞形态。细胞呈圆形或多角形，具有丰富的胞质外基质（分泌Ⅱ型胶原和蛋白聚糖），在培养后期可能表现出一定的成纤维细胞样变化。

9. 传代能力：可传代2-4代，建议在低传代次数（P2-P3）内完成关键实验。

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：Ⅱ型胶原（Type II Collagen） 免疫细胞化学染色为阳性，蛋白聚糖（Aggrecan） 免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的软骨细胞形态。贴壁生长状态下，细胞呈圆形或多角形，具有丰富的胞质外基质（分泌Ⅱ型胶原和蛋白聚糖），在培养后期可能表现出一定的成纤维细胞样变化。

2. 来源与特性：来源于大鼠下颌骨的髁突软骨。通过专业酶消化法（如胶原酶、胰蛋白酶）分离获得，旨在保留其体内功能特性。细胞具有分泌软骨特异性细胞外基质（ECM）的能力。

3. 分子与功能特性：

标志物表达：高表达软骨细胞特异性标志物，如Ⅱ型胶原（Type II Collagen） 和蛋白聚糖（Aggrecan），用于鉴定其身份和纯度。

功能特性：负责分泌和维持软骨特有的细胞外基质，如Ⅱ型胶原纤维网络和蛋白聚糖，是关节软骨和生长板软骨的主要细胞类型。

培养与诱导：在特定条件下（如三维培养、特定生长因子诱导），可保持或恢复其软骨表型，是软骨组织工程和再生医学研究的关键种子细胞。

应用领域：广泛应用于软骨损伤修复、骨关节炎研究、软骨组织工程、干细胞分化诱导等领域。

三、培养条件

1. 专用培养基：大鼠髁突软骨细胞专用培养基（需额外添加生长因子，如TGF-β、BMP等，以维持软骨表型）。

2. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

四、产品应用

1. 软骨组织工程与再生：作为软骨损伤修复研究的核心细胞模型，用于构建软骨-骨复合体、评估生物材料或生长因子对软骨细胞表型的维持。

2. 骨关节炎（OA）机制研究：作为体外模型，研究机械应力、炎症因子（如IL-1β、TNF-α）等对髁突软骨细胞的代谢、增殖、凋亡及细胞外基质降解的影响。

3. 干细胞向软骨分化诱导：与间充质干细胞（MSCs） 共培养或作为诱导微环境的组成部分，用于研究并优化干细胞向软骨细胞定向分化的方案。

4. 颞下颌关节（TMJ）疾病模型：用于研究颞下颌关节紊乱、髁突吸收、创伤后髁突改建等病理过程。

5. 药物筛选与毒性评估：用于筛选和评估对软骨细胞有保护或损伤作用的候选药物、生物制剂及化学物质。

五、产品优势

1. 高纯度与特异性：经Ⅱ型胶原和蛋白聚糖双重免疫荧光/化学染色严格鉴定，纯度高于90%，确保了产品细胞群为功能明确的髁突软骨细胞，而非混杂的成纤维细胞或其他非软骨组织细胞。

2. 强大的基质分泌能力：细胞保持了分泌软骨特异性细胞外基质的能力，包括Ⅱ型胶原纤维网络和蛋白聚糖，在标准培养条件下可维持其表型，可通过阿利新蓝染色、番红O染色等方法清晰验证。

3. 颞下颌关节研究的理想模型：直接来源于下颌骨髁突软骨，是研究颞下颌关节生物学、软骨细胞功能及TMJ相关疾病的最相关、最直接的原代细胞模型之一。

4. 适用于多种工程化培养体系：该细胞易于在三维支架（如水凝胶、藻酸盐）中进行培养，是构建复杂体外模型（如TMJ软骨模型、软骨-骨整合模型）不可或缺的组成部分。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查T25细胞瓶是否完好，瓶内培养基有无漏液、浑浊。

稳定细胞：用75%酒精棉球彻底擦拭细胞瓶外壁消毒。在超净工作台内小心拆开封口膜，将细胞瓶平稳放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，使细胞充分贴壁。

首次镜检与记录：静置后，在倒置显微镜下观察细胞形态（可见典型的圆形或多角形软骨细胞，胞质丰富）、贴壁密度及有无污染，并拍照存档。

2. 传代操作（软骨细胞去分化风险较高）：

传代时机：当细胞密度达到80%-90% 融合，形成致密单层时，可进行传代。软骨细胞贴壁非常牢固，且增殖能力有限，传代频率不宜过高。

洗涤细胞：小心吸弃旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻冲洗细胞层后吸弃。

消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使其覆盖瓶底。
b. 可立即吸出大部分消化液，仅保留薄层（或根据细胞贴壁牢固程度，保留全部消化液消化稍长时间）。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

终止消化：在显微镜下观察，待细胞间隙增大、胞体开始变圆、部分细胞开始脱落时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

收集细胞：用吸管轻柔吹打瓶底，使细胞完全脱落。软骨细胞可能连接较紧密，可适当吹打使其分散成单细胞或小细胞团。

接种与培养：将细胞悬液按1:2至1:3的传代比例接种到新的T25培养瓶中。加入新鲜专用完全培养基至总体积约5mL。

后续培养：将细胞瓶放回培养箱。细胞贴壁较快，待完全贴壁后，每2-3天更换一次新鲜培养基。

3. 冻存操作（建议使用低代次细胞）：

选择状态佳细胞：选择生长状态良好、处于对数生长期的细胞进行冻存。

制备细胞悬液：按上述方法消化、离心收集细胞，弃上清。

配制冻存液：使用配套的无血清细胞冻存液或含10%DMSO的完全培养基重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

程序冻存：分装至冻存管，标记清晰。采用程序降温盒进行梯度降温后，最终转入液氮中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。