一、基本信息

1. 产品编号：HY-J200

2. 产品名称：大鼠原代肾小管上皮细胞

3. 英文名称：Rat Renal Tubular Epithelial Cells (RTECs)

4. 种属来源：大鼠

5. 组织来源：肾脏组织（主要分离自肾小管）

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：上皮细胞样，呈典型的“铺路石”状或不规则多边形

9. 传代能力：传代能力有限，可传1-2代

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：细胞角蛋白-18（CK-18）免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 专用培养基：大鼠肾小管上皮细胞完全培养基

14. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递

18. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的肾小管上皮细胞形态。细胞呈铺路石状或多边形，形态不规则，边界清晰。贴壁生长时排列紧密，形成单层上皮样结构，具有明显的上皮细胞集落特征。

2. 来源与特性：采用先机械研磨过筛分离肾小管片段、后胶原酶消化的方法，并结合上皮细胞专用培养基进行培养筛选制备，有效富集来源于肾小管的上皮细胞。

3. 分子与功能特性：

上皮细胞标志：高表达细胞角蛋白-18（CK-18），是肾小管上皮细胞的特异性中间丝蛋白，用于鉴定细胞来源与纯度。

重吸收与排泌功能：作为肾单位的重要组成部分，肾小管上皮细胞具有重吸收原尿中葡萄糖、氨基酸、电解质和水分的功能，并能排泌代谢废物和药物。体外培养的细胞保留了部分相关的转运体（如Na⁺/K⁺-ATP酶）和通道蛋白表达基础。

炎症与纤维化中的关键角色：在肾脏损伤（如缺血再灌注、药物毒性、梗阻）时，肾小管上皮细胞可被激活，表达炎症介质（如细胞因子、趋化因子）、MHC-II类抗原等，直接参与急性肾损伤（AKI） 和慢性肾脏病（CKD） 向肾间质纤维化发展的病理过程，是研究肾脏疾病机制的核心靶细胞。

内分泌功能：可产生并响应多种活性物质，参与局部和全身的生理病理调节。

三、培养条件

1. 专用培养基：大鼠肾小管上皮细胞完全培养基

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

3. 换液频率：每2-3天更换一次新鲜完全培养基，以维持稳定的生长环境。

四、产品应用

1. 肾脏生理与药理学研究：用于研究肾脏对药物、毒素（如顺铂、庆大霉素、重金属）的代谢、排泄过程及其肾毒性机制，评估肾保护药物的效果。

2. 急性肾损伤（AKI）研究：建立缺血缺氧、药物毒性或氧化应激模型，研究肾小管上皮细胞在AKI发生发展过程中的损伤、凋亡、坏死及修复机制。

3. 慢性肾脏病与纤维化研究：研究转化生长因子-β1（TGF-β1）等促纤维化因子如何诱导肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化（EMT），并分泌细胞外基质，从而探讨肾间质纤维化的细胞学起源与调控通路。

4. 肾脏免疫与炎症研究：研究在免疫复合物沉积、自身免疫或感染情况下，肾小管上皮细胞如何作为非专职抗原提呈细胞被激活，表达共刺激分子并分泌炎症因子，参与肾脏局部炎症反应。

5. 水盐代谢与酸碱平衡研究：作为研究肾脏离子通道（如ENaC）、转运体功能及其调控机制的体外细胞模型。

五、产品优势

1. 高纯度与特异性：通过机械过筛与酶消化相结合的专利方法，有效分离肾小管片段，并利用选择性培养基进行纯化培养，经CK-18免疫荧光染色严格鉴定，纯度高于90%，确保了细胞的高度同质性。

2. 生理与病理相关性高：作为原代细胞，直接来源于肾脏组织，最大程度保留了体内肾小管上皮细胞的形态、标志物表达及关键功能特性，是模拟肾脏生理功能及研究肾脏疾病病理机制的“金标准”模型，尤其适用于肾毒性评价和纤维化机制研究。

3. 研究应用价值突出：该细胞是研究急性肾损伤和慢性肾脏病（特别是肾间质纤维化）的核心细胞类型，在药物研发和疾病机制研究中具有不可替代的地位。

4. 配套体系专业可靠：提供专门优化配制的大鼠肾小管上皮细胞完全培养基，为细胞在体外的贴壁、生长和功能维持提供了最佳保障。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，首先检查T25细胞瓶外观是否完好，培养基有无漏液或浑浊现象。

稳定细胞：用75%酒精仔细消毒细胞瓶外壁，在超净工作台内拆开封口膜。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，使细胞充分适应新环境并稳定贴壁。

首次镜检：静置后，取出细胞瓶在倒置显微镜下观察。记录细胞的形态（应为铺路石状）、贴壁率、密度以及有无污染迹象，并拍照存档。

2. 传代操作（细胞传代能力弱，建议直接使用）：

传代时机：当细胞密度增长至80%-90% 融合时，可考虑传代。请注意，该原代细胞增殖能力有限，强烈建议在收到后尽早直接用于实验，避免不必要的传代。

洗涤细胞：小心吸弃培养瓶内的旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻晃动后吸弃，以洗去残留的血清和代谢废物。

温和消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使其均匀覆盖瓶底细胞层。
b. 立即吸出大部分消化液，仅保留一薄层覆盖细胞（此步骤对防止过度消化至关重要）。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

终止消化：在显微镜下密切观察，待约80%的细胞间隙增大、胞体回缩变圆时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

细胞收集：用吸管轻柔地反复吹打瓶底，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。避免剧烈吹打。

接种与培养：将细胞悬液按1:2的比例接种到新的T25培养瓶中（即1瓶传2瓶）。补充新鲜专用完全培养基至每瓶约5mL。

后续培养：将细胞瓶放回培养箱。待细胞重新贴壁伸展后（通常需过夜），每2-3天更换一次新鲜培养基。

3. 冻存操作（如确需保存）：

选择最佳状态细胞：尽量使用原代或第一代（P1）且处于对数生长期的细胞进行冻存。

制备细胞悬液：按上述传代方法消化并收集细胞，离心后弃上清。

配制冻存液：使用配套的无血清细胞冻存液或含10%DMSO的胎牛血清冻存液重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

分装冻存：将细胞悬液分装至冻存管，做好标记。采用程序降温盒进行梯度降温，最终转移至液氮中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。