一、基本信息

1. 产品编号：HY-J230

2. 产品名称：大鼠原代胸腺细胞

3. 英文名称：Rat Thymocyte Cells

4. 种属来源：大鼠

5. 组织来源：胸腺组织

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：上皮细胞样，呈典型的“铺路石”状或不规则多边形

9. 传代能力：传代能力有限，可传1-2代

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 专用培养基：大鼠胸腺细胞完全培养基

14. 培养条件：温度：37℃；；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递

18. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的胸腺上皮细胞形态。细胞呈铺路石状或不规则多边形，边界清晰，贴壁生长时排列紧密，形成单层或多层上皮样结构。细胞核较大，胞质丰富。

2. 来源与特性：来源于大鼠胸腺组织，胸腺作为中枢免疫器官，是T淋巴细胞分化、发育、成熟的主要场所。本产品主要富集了胸腺上皮细胞（TECs），它们是构成胸腺微环境、支持T细胞发育的关键基质细胞。

3. 分子与功能特性：

上皮细胞标志：高表达广谱角蛋白（PCK），是胸腺上皮细胞的特有标志物，用于鉴定细胞来源与纯度。

胸腺微环境的核心组分：胸腺上皮细胞（尤其是髓质上皮细胞，mTECs）负责表达自身抗原（如Aire基因调控），通过呈递自身抗原给发育中的T细胞，是T细胞阴性选择（清除自身反应性T细胞）和中枢性免疫耐受建立的关键执行者。

分泌功能：能够分泌多种细胞因子（如IL-7、CCL25、CXCL12等）和胸腺激素（如胸腺素、胸腺生成素），为T细胞前体的归巢、增殖、分化和成熟提供必需的细胞因子微环境。

免疫调控功能：通过与胸腺细胞（发育中的T细胞）的直接接触和旁分泌作用，精密调控T细胞的阳性选择、阴性选择及谱系定向分化（CD4+或CD8+ T细胞）。

三、培养条件

1. 专用培养基：大鼠胸腺细胞完全培养基

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

3. 换液频率：每2-3天更换一次新鲜完全培养基，以维持细胞生长所需的营养和信号因子。

四、产品应用

1. T细胞发育与胸腺功能研究：作为胸腺微环境的核心细胞模型，用于研究T细胞前体在胸腺内的归巢、增殖、TCR重排、阳性选择、阴性选择及谱系定向分化的分子机制。

2. 中枢免疫耐受机制研究：研究胸腺上皮细胞如何表达和组织特异性自身抗原（由Aire基因调控），并通过呈递给发育中的T细胞，从而清除自身反应性T细胞、建立中枢性免疫耐受，探索自身免疫病的发病根源。

3. 免疫缺陷与胸腺再生研究：用于研究衰老、疾病（如HIV感染）、放疗/化疗后胸腺功能退化或损伤的机制，并评估促进胸腺上皮细胞再生、恢复胸腺功能的潜在治疗策略（如生长因子、激素疗法）。

4. 自身免疫病模型研究：通过体外模拟，研究自身免疫病（如重症肌无力、1型糖尿病、系统性红斑狼疮）中，胸腺上皮细胞的功能异常（如Aire基因突变、自身抗原表达异常）如何导致自身反应性T细胞逃逸，从而引发疾病。

5. 胸腺肿瘤研究：作为研究胸腺瘤、胸腺癌等胸腺上皮源性肿瘤的起源、分子特征及药物反应的体外模型。

五、产品优势

1. 高纯度富集：从胸腺组织中有效分离并富集了关键的基质细胞——胸腺上皮细胞，经PCK免疫荧光染色严格鉴定，纯度高于90%，确保了细胞群体的同质性和功能特异性。

2. 独特的免疫学研究价值：作为构成中枢免疫器官（胸腺） 微环境的核心细胞，该产品提供了研究T细胞发育、中枢免疫耐受建立及自身免疫病机制的宝贵原代细胞模型，是连接基础免疫学与临床疾病研究的桥梁。

3. 生理相关性高：直接来源于胸腺组织，保留了体内胸腺上皮细胞的关键形态、分子标志（PCK）及分泌功能，能够更真实地模拟胸腺内的生理和病理过程。

4. 配套培养体系专业：提供专门为维持大鼠胸腺上皮细胞体外生长和功能而优化的完全培养基，为细胞的稳定培养和实验的可靠性提供了保障。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查T25细胞培养瓶是否完好，瓶口有无松动，培养基有无漏液、浑浊或变色。

稳定细胞：用75%酒精棉球彻底擦拭细胞瓶外壁消毒。在超净工作台内拆开封口膜，将细胞瓶平稳放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，让细胞从运输状态中恢复并重新贴壁。

首次观察与记录：静置后，在倒置显微镜下仔细观察细胞。记录其形态（应为铺路石状）、贴壁密度、有无污染（如黑点、菌丝）等，并务必拍照存档，作为细胞初始状态的依据。

2. 传代操作（传代能力弱，建议直接使用）：

传代时机：当细胞密度达到80%-90% 融合时，可考虑进行传代。重要提示：该原代胸腺上皮细胞增殖能力有限，强烈建议客户收到细胞后尽快开展实验，避免不必要的传代操作。

洗涤：小心吸弃旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻晃动培养瓶后吸弃，以去除残留的代谢物。

温和消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身确保液体覆盖整个瓶底。
b. 立即吸出大部分消化液，仅保留一薄层覆盖细胞（这是防止细胞过度消化的关键步骤）。
c. 将培养瓶放回37℃培养箱，消化1-3分钟。

终止消化：在显微镜下密切观察，待大部分细胞间隙增大、形态变圆、但尚未漂浮时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

收集细胞：用吸管轻柔地吹打瓶底，使细胞脱落形成单细胞悬液。动作需轻柔，避免产生过多气泡损伤细胞。

接种与培养：将细胞悬液按1:2的传代比例接种到新的T25培养瓶中。向每个新瓶中加入新鲜专用完全培养基至总体积约5mL。

后续维护：将细胞瓶放回培养箱。待细胞重新贴壁（通常需过夜）后，每2-3天更换一次新鲜培养基。

3. 冻存操作（如确需保存）：

选择状态最佳细胞：尽量使用原代或第一代（P1）、且处于良好生长状态的细胞进行冻存。

制备细胞悬液：按上述方法消化、收集细胞，离心后弃上清。

配制冻存液：使用配套的无血清细胞冻存液或含10%DMSO的胎牛血清冻存液重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

程序冻存：将细胞悬液分装至冻存管，标记清楚。使用程序降温盒进行梯度降温（4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜），最后转入液氮罐中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。