一、基本信息

1. 产品编号：HY-J237

2. 产品名称：大鼠原代脑微血管内皮细胞

3. 英文名称：Rat Cerebral Microvascular Endothelial Cells (RCMECs)

4. 种属来源：大鼠

5. 组织来源：脑组织（主要来源于脑微血管）

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：内皮细胞样，呈典型的“铺路石”状或纺锤形，排列紧密

9. 传代能力：可传代2-3代

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1 mL冻存管

12. 质量检测：血管性假血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性，纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 专用培养基：大鼠脑微血管内皮细胞专用培养基

14. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递

18. 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的脑微血管内皮细胞形态。细胞呈铺路石状或长梭形，单层贴壁生长时排列紧密，形成连续的“鹅卵石”样镶嵌结构，具有清晰可见的细胞边界。

2. 来源与特性：采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法，从脑组织中高效分离微血管片段，并利用内皮细胞专用培养基进行选择性培养和纯化，从而获得高纯度的脑微血管内皮细胞。

3. 分子与功能特性：

内皮细胞标志：高表达血管性假血友病因子（vWF），这是内皮细胞（尤其脑内皮细胞）特异性分泌的糖蛋白，是鉴定细胞身份与功能活性的金标准标志物。

血脑屏障（BBB）的核心组分：脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障（BBB） 最主要、最关键的细胞成分，形成连续的非窗孔结构，并通过紧密连接蛋白（如Claudin-5, Occludin, ZO-1） 形成高阻抗的细胞旁通路，严格限制血液中物质（尤其是大分子和亲水性分子）的自由进入。

极化的转运系统：细胞膜上存在不对称定位的酶（如γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶）和多种特异性转运体（如葡萄糖转运体GLUT1、氨基酸转运体），形成载体介导的跨细胞转运系统，选择性调节营养物质和代谢废物进出脑组织。

低水平的液相胞饮作用：与外周内皮细胞相比，脑微血管内皮细胞的液相胞饮活性极低，进一步限制了非特异性物质的内吞转运，巩固了BBB的屏障功能。

分泌与免疫调节功能：能够分泌前列环素、一氧化氮等血管活性物质，调节局部血管张力；同时表达细胞粘附分子（如ICAM-1, VCAM-1），在炎症状态下调控白细胞向中枢神经系统的浸润。

三、培养条件

1. 专用培养基：大鼠脑微血管内皮细胞专用培养基

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：饱和湿度

3. 换液频率：每2-3天更换一次新鲜完全培养基，以维持细胞生长和屏障功能。

四、产品应用

1. 血脑屏障（BBB）功能与通透性研究：建立体外BBB模型，用于研究生理及病理（如缺血、缺氧、炎症、感染）条件下，脑微血管内皮细胞的屏障完整性、紧密连接蛋白表达与功能、跨内皮电阻（TEER）及药物/分子通透性的变化。

2. 中枢神经系统（CNS）药物递送研究：作为药物血脑屏障穿透性评价的核心体外模型，用于筛选能够通过BBB的候选药物，并研究新型递药系统（如纳米载体、抗体递送）跨越或靶向BBB的机制。

3. 脑血管疾病与神经退行性疾病研究：研究在脑卒中、阿尔茨海默病、帕金森病等疾病中，脑微血管内皮细胞的功能障碍（如屏障破坏、炎症激活、转运体下调）及其在疾病发生发展中的作用。

4. 神经血管单元（NVU）研究：作为神经血管单元的核心细胞，用于研究与星形胶质细胞、周细胞、神经元等共培养的模型，探讨细胞间通讯在BBB发育、稳态维持及损伤修复中的作用。

5. 脑部肿瘤（如胶质瘤）研究：研究脑肿瘤微环境中，肿瘤细胞如何影响脑微血管内皮细胞的增殖、迁移及管腔形成能力，从而促进肿瘤血管新生（血管生成）。

五、产品优势

1. 高纯度与屏障特性保留：采用酶消化联合密度梯度离心的专业分离方法，有效富集脑微血管内皮细胞，经vWF免疫荧光染色严格鉴定纯度>90%。体外培养的细胞能较好地保持其体内关键的紧密连接蛋白表达和低胞饮活性，是构建体外BBB模型的理想细胞来源。

2. 血脑屏障研究的“金标准”细胞模型：作为血脑屏障（BBB） 的核心构成细胞，该产品直接反映了脑内毛细血管内皮细胞的生理与病理特性，是研究药物脑内递送、脑血管疾病及神经炎症机制的最具生理相关性的原代细胞模型。

3. 器官特异性强：与外周血管内皮细胞相比，脑微血管内皮细胞在形态、分子表达和功能上具有显著的特异性（如紧密连接、极化转运系统），确保了研究结果的准确性和可靠性。

4. 配套培养体系针对性强：提供专门优化的脑微血管内皮细胞专用培养基，旨在支持细胞的高效贴壁、增殖及关键屏障特性的维持。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查T25细胞瓶是否完好，瓶内培养基有无漏液、浑浊或颜色异常。

稳定细胞：用75%酒精棉球彻底擦拭细胞瓶外壁。在超净工作台内小心拆开封口膜，将细胞瓶平稳放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，使细胞从运输应激中恢复并充分贴壁。

首次镜检与记录：静置后，在倒置显微镜下观察细胞形态（应为铺路石样）、贴壁密度及有无污染迹象，并拍照存档，作为细胞初始状态的证据。

2. 传代操作（建议尽早使用，传代能力有限）：

传代时机：当细胞密度达到80%-90% 融合时，可进行传代。

洗涤细胞：小心吸弃旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻冲洗细胞层后吸弃，以去除残留代谢物。

温和消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使消化液均匀覆盖瓶底。
b. 立即吸出大部分消化液，仅保留一薄层覆盖细胞（此步骤可有效防止过度消化）。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

终止消化：在显微镜下密切观察，待约80%的细胞变圆、间隙增大但尚未脱落时，立即加入5mL新鲜专用完全培养基终止消化。

细胞收集：用吸管轻柔地吹打瓶底，使细胞完全脱落形成单细胞悬液。避免用力过猛产生剪切力。

接种与培养：将细胞悬液按1:2的传代比例接种到新的T25培养瓶中。向每个新瓶中加入新鲜专用完全培养基至总体积约5mL。

后续培养：将细胞瓶放回培养箱。待细胞重新贴壁伸展后（通常需过夜），每2-3天更换一次新鲜培养基。

3. 冻存操作（如需保存）：

选择状态良好细胞：尽量使用原代或早期代次（P1-P2）、生长状态良好的细胞进行冻存。

制备细胞悬液：按上述方法消化、离心收集细胞，弃上清。

配制冻存液：使用配套的无血清细胞冻存液或含10%DMSO的胎牛血清冻存液重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

分装与程序冻存：将细胞悬液分装至冻存管，标记清晰。采用程序降温盒进行梯度降温，最终转移至液氮中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。