一、基本信息

1. 产品编号：HY-C120

2. 细胞名称：L-WRN细胞株（小鼠皮下结缔组织细胞）

3. 英文名称：L-WRN cell line

4. ATCC编号：CRL-3276

5. 种属来源：小鼠（雄性C3H/An）

6. 组织来源：皮下结缔组织（乳晕和脂肪）

7. 生长特性：贴壁生长

8. 产品规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管

9.  细胞形态：成纤维细胞样

二、细胞特征

1. 形态特征：典型成纤维细胞样形态，贴壁生长特性。

2. 生物学特性：基因工程改造：通过R-spondin 3和noggin共表达载体转染L-Wnt3A细胞获得

3. 基因表达：稳定表达Wnt-3A、R-spondin 3和Noggin

4. 分泌特性：同时分泌Wnt、R-spondin和Noggin蛋白

5. 筛选条件：含G-418（0.5 mg/mL）和潮霉素B（0.5 mg/mL）

6. 安全等级：2级

7. 无菌检测：细菌、真菌、支原体检测阴性

8. 细胞活力：≥90%

三、培养条件

1. 培养基：DMEM＋10% FBS＋0.5 mg/mL G-418＋0.5 mg/mL hygromycin B＋1% P/S

2. 培养环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度

3. 消化酶：0.25% 胰蛋白酶-0.02% EDTA

4. 传代参数：比例：1:2至1:3

                      频率：每周2-3次

                      最佳密度：80%-90%汇合度

5. 离心参数：1000 rpm，5分钟

四、主要应用

1. 条件培养基生产：Wnt-3A条件培养基来源、R-spondin 3条件培养基来源、Noggin条件培养基来源。

2. 干细胞研究：肠道类器官培养、哺乳动物组织干细胞研究。

五、产品优势

1. 经济效益：相较于重组蛋白，制备条件培养基成本更低，提供高浓度且相对完整的蛋白质组合。

六、培养方法

1. 细胞复苏：37℃水浴快速解冻，离心重悬

2. 细胞传代：80%-90%汇合度时传代

3. 细胞冻存：冻存液：完全培养基＋5-10% DMSO

                      冻存密度：5×10⁶~1×10⁷ cells/mL

                      保存条件：液氮长期保存

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。