一、基本信息

1. 产品编号：HY-M022

2. 产品名称：狗原代心肌成纤维细胞永生化

3. 英文名称：Immortalized Canine Cardiac Fibroblasts

4. 种属来源：犬（狗）

5. 组织来源：正常心脏组织

6. 细胞类型：永生化细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：典型的成纤维细胞样，呈长梭形。

9. 传代能力：无限增殖能力。

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶

12. 质量检测：纤维连接蛋白（Fibronectin） 免疫荧光染色为阳性，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 永生化方法：通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

14. 完全培养基配置：基础培养基500ml + 生长添加剂5ml + 胎牛血清50ml + 双抗5ml

15. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：培养箱湿度70%-80%

16. 换液频率：每2-3天换液一次

17. 消化液：0.25%胰蛋白酶

18. 冻存条件：冻存液：90%胎牛血清（FBS）+ 10% DMSO；或使用非程序冻存液（货号：JY-H040）

19. 供应限制：仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的成纤维细胞形态。细胞贴壁生长，呈长梭形，具有细长的细胞质突起，细胞核呈卵圆形。排列有序，可形成典型的“涡流状”或平行排列的生长模式。

2. 来源与特性：来源于犬正常心脏组织，经原代分离后，通过慢病毒转染SV40大T抗原基因实现永生化。SV40基因的引入使细胞突破了复制衰老的限制，获得了在体外长期稳定增殖的能力。

3. 分子与功能特性：

标志物表达：高表达成纤维细胞特异性标志物，如纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin） 和I型胶原（Collagen I），保留了原代心肌成纤维细胞的基本表型特征。

细胞外基质合成与重塑：保留了合成和分泌心脏细胞外基质（ECM）成分的能力，如胶原蛋白、纤连蛋白等，并参与ECM的重塑，这在心脏纤维化病理过程中至关重要。

心脏病理研究的核心模型：心脏中，心肌成纤维细胞约占细胞总数的60%-70%，是心脏间质的主要细胞。该细胞与心肌纤维化、心肌肥大、心肌梗死后瘢痕形成、心力衰竭以及心脏炎症等病理状态密切相关。

分泌功能与细胞间通讯：能分泌多种细胞因子（如TGF-β、CTGF）、趋化因子和生长因子，参与心脏的炎症反应、修复过程，并与心肌细胞、内皮细胞等相互作用，影响心脏功能。

无限增殖优势：解决了原代细胞数量有限、增殖能力随代次下降的问题，可为长期、大规模的实验（如高通量药物筛选、基因编辑、稳定株构建）提供稳定、均一的细胞来源。

三、培养条件

1. 完全培养基：专用基础培养基，需额外添加10%胎牛血清、1%生长添加剂和1%双抗。

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：70%-80%

四、产品应用

1. 心肌纤维化机制与药物研发：作为研究心肌纤维化发生发展机制的核心体外模型，用于筛选和评估抗纤维化药物（如血管紧张素受体拮抗剂、醛固酮拮抗剂等）对成纤维细胞活化、增殖及胶原合成的影响。

2. 心力衰竭与心脏重构研究：用于研究在压力负荷、缺血等刺激下，心肌成纤维细胞如何被激活并促进心脏不良重构，探索治疗新靶点。

3. 心脏疾病高通量筛选：凭借其无限增殖能力和稳定的表型，非常适合用于构建稳定的报告基因细胞系，进行大规模化合物库、siRNA或CRISPR文库的高通量筛选。

4. 基因功能研究：易于进行基因过表达、敲低或敲除操作，是研究特定基因在心肌成纤维细胞功能（如增殖、迁移、分泌）中作用的理想工具。

5. 心脏组织工程与细胞治疗：作为种子细胞或与心肌细胞共培养，用于构建体外心脏组织模型，或研究其在心脏修复中的作用。

6. 比较心脏病学研究：作为犬源细胞模型，为犬心脏病（如扩张型心肌病）的研究及宠物心血管药物的开发提供重要工具。

五、产品优势

1. 无限增殖，稳定供应：经SV40基因永生化，突破了原代细胞的增殖极限，可在体外长期稳定传代，为实验提供可重复、可持续的细胞来源，避免了批次间差异。

2. 保留关键原代表型：尽管经过永生化处理，但细胞仍高表达纤维连接蛋白（Fibronectin） 等成纤维细胞标志物，保留了合成细胞外基质和响应病理刺激（如TGF-β）的基本功能，是功能研究的可靠模型。

3. 犬心脏病研究的专属工具：直接来源于犬心脏，是研究犬心肌纤维化、心肌病等犬心脏病以及开发相应治疗药物的高度相关且稀缺的细胞模型。

4. 适用于高强度实验操作：其稳定的生长特性和强大的增殖能力，使其能够耐受多次传代、冻存复苏、转染以及长时间的药物处理等复杂实验流程。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查T25细胞瓶是否完好，瓶内培养基有无漏液、浑浊。

稳定细胞：用75%酒精棉球彻底擦拭细胞瓶外壁消毒。在超净工作台内小心拆开封口膜，将细胞瓶平稳放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，使细胞充分贴壁。

首次镜检与记录：静置后，在倒置显微镜下观察细胞形态（应为典型的长梭形）、贴壁密度及有无污染，并拍照存档。

2. 传代操作（增殖能力强，需注意及时传代）：

传代时机：当细胞密度达到80%-90% 融合时，即可进行传代，避免过度生长导致细胞堆积和状态下降。

洗涤细胞：小心吸弃旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻冲洗细胞层后吸弃。

消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使其覆盖瓶底。
b. 可立即吸出大部分消化液，仅保留薄层覆盖细胞。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2分钟（永生化细胞可能对胰酶更敏感，需缩短时间）。

终止消化：在显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，立即加入5mL新鲜完全培养基终止消化。

收集细胞：用吸管轻柔吹打瓶底，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。

接种与培养：将细胞悬液按1:2至1:3的传代比例接种到新的T25培养瓶中。加入新鲜完全培养基至总体积约5mL。

后续维护：将细胞瓶放回培养箱。细胞贴壁快，增殖迅速，需每2-3天更换一次新鲜完全培养基，并根据生长情况及时传代。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。