一、基本信息

1. 产品编号：HY-M023

2. 产品名称：狗原代肺成纤维细胞

3. 英文名称：Canine Lung Fibroblasts

4. 种属来源：犬（狗）

5. 组织来源：正常肺组织

6. 细胞类型：原代细胞

7. 生长特性：贴壁生长

8. 细胞形态：典型的成纤维细胞样，呈长梭形，具有细长的细胞质突起。

9. 传代能力：可传代5代以上，建议在低传代次数（P3-P5）内完成关键实验。

10. 生物安全等级：1级

11. 产品规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶

12. 质量检测：纤维连接蛋白（Fibronectin） 免疫荧光染色为阳性，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

13. 完全培养基配置：基础培养基500ml + 生长添加剂5ml + 胎牛血清50ml + 双抗5ml

14. 培养条件：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：培养箱湿度70%-80%

15. 换液频率：每2-3天换液一次

16. 消化液：0.25%胰蛋白酶

17. 运输方式：T25培养瓶/顺丰快递

18. 供应限制：仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

二、细胞特征

1. 形态特征：典型的成纤维细胞形态。细胞贴壁生长，呈长梭形，具有细长的细胞质突起，细胞核呈卵圆形。在培养过程中，细胞排列有序，可形成典型的“涡流状”或平行排列的生长模式。

2. 来源与特性：来源于犬正常肺组织，通过酶消化法分离获得。肺成纤维细胞是肺间质中含量最丰富的细胞类型，构成肺泡隔的支撑结构，并参与细胞外基质的合成与重塑。

3. 分子与功能特性：

标志物表达：高表达成纤维细胞特异性标志物，如纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin） 和I型胶原（Collagen I），用于鉴定其身份和纯度。

细胞外基质合成：负责合成和分泌肺间质的主要细胞外基质成分，包括III型胶原、弹性蛋白以及蛋白多糖，对维持肺组织的结构和弹性至关重要。

损伤修复与纤维化：在肺部损伤（如炎症、机械损伤）后，肺成纤维细胞被激活，增殖并向损伤部位迁移，参与组织修复和重建。过度或异常的成纤维细胞活化与聚集是肺纤维化（如特发性肺纤维化）的关键病理特征。

免疫调节与炎症反应：能分泌多种细胞因子（如TGF-β、IL-6）、趋化因子和生长因子，参与调节局部免疫反应和炎症进程，与肺泡上皮细胞、免疫细胞等相互作用。

应用领域：广泛应用于肺纤维化机制研究、药物筛选、肺组织工程、炎症模型构建等领域。

三、培养条件

1. 完全培养基：专用基础培养基，需额外添加10%胎牛血清、1%生长添加剂和1%双抗。

2. 培养环境：温度：37℃；气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；湿度：70%-80%

四、产品应用

1. 肺纤维化疾病模型：作为核心体外模型，研究肺成纤维细胞在特发性肺纤维化（IPF）、矽肺等疾病中的异常活化、增殖、迁移及过度基质沉积的分子机制。

2. 药物筛选与药效评价：用于筛选和评估抗纤维化药物（如尼达尼布、吡非尼酮）、抗炎药物或新型化合物对肺成纤维细胞活化、增殖及胶原合成能力的抑制作用。

3. 肺损伤与修复研究：研究在急性肺损伤、慢性阻塞性肺疾病（COPD）等情况下，肺成纤维细胞如何响应损伤信号，参与组织修复与重构。

4. 细胞外基质生物学研究：用于研究肺成纤维细胞合成和降解细胞外基质（如胶原、纤连蛋白）的调控机制，以及基质刚度对细胞行为的反馈影响。

5. 共培养与组织工程：与肺泡上皮细胞、肺微血管内皮细胞等进行共培养，构建更复杂的体外肺模型，用于研究细胞间相互作用、屏障功能及组织工程肺的构建。

五、产品优势

1. 高纯度与明确鉴定：经纤维连接蛋白（Fibronectin）免疫荧光染色严格鉴定，纯度可达90%以上，确保了产品细胞群为功能明确的肺成纤维细胞，而非混杂的上皮细胞或平滑肌细胞。

2. 犬类疾病研究的理想模型：直接来源于犬肺组织，是研究犬类肺部疾病（如犬特发性肺纤维化）、进行比较医学研究以及评估宠物用药安全性与有效性的高度相关原代细胞模型。

3. 强大的增殖与基质分泌能力：细胞保持了良好的增殖活性和分泌细胞外基质的能力，易于在体外扩增，并能响应促纤维化因子（如TGF-β）的刺激，模拟病理状态。

4. 配套培养基优化生长：提供明确的完全培养基配方（含专用生长添加剂），旨在支持狗肺成纤维细胞的快速贴壁、增殖及功能维持。

六、培养方法

1. 收货处理（T25瓶发货）：

收货检查：收到细胞后，立即检查T25细胞瓶是否完好，瓶内培养基有无漏液、浑浊。

稳定细胞：用75%酒精棉球彻底擦拭细胞瓶外壁消毒。在超净工作台内小心拆开封口膜，将细胞瓶平稳放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，使细胞充分贴壁。

首次镜检与记录：静置后，在倒置显微镜下观察细胞形态（应为典型的长梭形）、贴壁密度及有无污染，并拍照存档。

2. 传代操作（成纤维细胞增殖能力较强）：

传代时机：当细胞密度达到80%-90% 融合，细胞排列致密时，可进行传代。

洗涤细胞：小心吸弃旧培养基，加入适量预温的PBS缓冲液，轻轻冲洗细胞层后吸弃。

消化：
a. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1mL，轻轻转动瓶身使其覆盖瓶底。
b. 可立即吸出大部分消化液，仅保留薄层覆盖细胞。
c. 将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟。

终止消化：在显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，立即加入5mL新鲜完全培养基终止消化。

收集细胞：用吸管轻柔吹打瓶底，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。

接种与培养：将细胞悬液按1:2至1:3的传代比例接种到新的T25培养瓶中。加入新鲜完全培养基至总体积约5mL。

后续维护：将细胞瓶放回培养箱。待细胞完全贴壁后，每2-3天更换一次新鲜完全培养基。

3. 冻存操作（建议使用低代次细胞）：

选择状态佳细胞：选择生长状态良好、处于对数生长期的细胞进行冻存。

制备细胞悬液：按上述方法消化、离心收集细胞，弃上清。

配制冻存液：使用90%胎牛血清（FBS） + 10% DMSO的冻存液，或使用非程序冻存液（货号：JY-H040） 重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁵ ~ 1×10⁶ cells/mL。

程序冻存：分装至冻存管，标记清晰。采用程序降温盒进行梯度降温后，最终转入液氮中长期保存。

七、注意事项

1. 无菌操作：所有操作在生物安全台内进行。

2. 传代时机：细胞密度达80%-90%时传代。

3. 消化控制：胰蛋白酶消化时间不宜过长。

4. 密度维持：保持适宜细胞生长密度。

5. 定期鉴定：建议定期进行STR鉴定。

6. 代次控制：建议使用低代次细胞进行实验。

7. 用途限制：仅限于科研用途。