一、细胞系溯源与模型定位

在免疫工程与生物材料研究领域，RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系）与THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系）构成了互补的体外模型体系，分别代表小鼠源与人源的巨噬细胞生物学研究平台。

RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的BALB/c小鼠肿瘤组织，具有典型的成熟巨噬细胞表型，悬浮-贴壁双重生长特性，可直接响应炎症刺激而无需预分化。THP-1细胞则分离自1岁男性急性单核细胞白

血病患儿的外周血，呈圆形悬浮生长，需经佛波酯（PMA）诱导方可分化为贴壁的巨噬细胞样表型（M0）。这两种细胞系在生物材料免疫调节评估中各有优势：RAW 264.7适用于快速筛选材料-免疫细胞互作效应；

THP-1则提供人源化数据，更贴近临床转化价值。两者联合应用可构建跨物种验证体系，增强生物材料免疫相容性评价。

二、巨噬细胞极化模型构建与表型鉴定

1. RAW 264.7极化方案

作为成熟巨噬细胞模型，RAW 264.7可直接进行表型极化诱导：

  ● M1型（促炎/经典激活）：LPS（200 ng/mL）+ IFN-γ（2.5-50 ng/mL），刺激24小时；

  ● M2型（抗炎/替代激活）：IL-4（10-25 ng/mL）或IL-4/IL-13联合（20/30 ng/mL），刺激48小时；

  ● 形态学特征：M1型呈现阿米巴样伸展形态，M2型保持纺锤形或上皮样外观。

CellFac RAW 264.7细胞系（货号：HY-C018）提供STR鉴定报告（确认小鼠源身份，排除人源细胞交叉污染），支原体检测阴性，确保极化实验的遗传背景纯净性。推荐使用DMEM高糖完全培养基（含4.5 g/L葡萄糖、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠及10%特级胎牛血清），在37°C、5% CO₂、饱和湿度条件下维持细胞处于未活化静息状态（M0）。

2. THP-1分化与极化方案

THP-1需经PMA诱导分化方可获得巨噬细胞功能表型：

（1）分化阶段：PMA（10-100 ng/mL，优化浓度10 ng/mL）处理24-48小时，诱导细胞贴壁并表达巨噬细胞标志物CD14、CD68；

（2）静息阶段：去除PMA后，在无PMA的完全培养基中维持24小时，使细胞进入稳定分化状态；

（3）极化阶段：

           ● M1诱导：LPS（1-15 ng/mL）+ IFN-γ（50 ng/mL），48小时；

           ● M2诱导：IL-4（25 ng/mL）+ IL-13（25 ng/mL），72小时。

CellFac THP-1细胞系（货号：HY-A260）经短串联重复序列（STR）鉴定，与ATCC标准株（TIB-202）100%匹配，核型分析确认为近三倍体人源细胞。CellFac提供THP-1细胞专用培养基（货号：HY-CSC-239），包含RPMI 1640基础培养基、活性炭/葡聚糖处理血清（CD-FBS，用于去除内源性激素干扰）及经过滤除菌的PMA储存液（1 mg/mL in DMSO），确保分化效率>95%。

3. 分子标志物与功能评价指标

（1）表型标志物检测

根据最新蛋白质组学研究，两种细胞系极化后呈现特征性标志物表达谱：

 （2）CellFac推荐检测方案：

           ● qRT-PCR：采用TaqMan探针法检测iNOS、CD206、TNF-α、IL-1β、Arg-1基因表达，以β-Actin为内参；

           ● 流式细胞术：使用FITC-anti-CD86、PE-anti-CD206、APC-anti-F4/80（RAW 264.7）或APC-anti-CD14

（THP-1）抗体组合，CellFac提供流式抗体预混套装；

           ● 功能学检测：Griess法检测亚硝酸盐（NO生成指标）、ELISA检测细胞因子分泌谱。

（3）NO/iNOS信号通路差异

值得注意的是，RAW 264.7与THP-1在一氧化氮（NO）产生能力上存在物种差异：

           ● RAW 264.7：LPS刺激后iNOS显著诱导，NO产量可达37.68 ± 3.19 μM，是研究炎症性NO信号的理想模型；

           ● THP-1：即使经PMA分化并经LPS刺激，NO产量仍较低（0.30-0.35 μM），且iNOS诱导不明显，这与人类巨噬细胞表观遗传调控机制有关。

因此，在评估生物材料的促炎/抗炎效应时，建议采用RAW 264.7进行初步筛选，THP-1进行人源验证的双模型策略。

三、生物材料免疫调节研究应用

1. 材料表面特性评估

两种细胞系广泛应用于评估生物材料的物理化学特性对巨噬细胞命运的影响：

（1）表面形貌（Topography）：

           ● 纳米纤维取向（Aligned PCL nanofibers）：诱导RAW 264.7向M1表型极化，促进IL-1β、TNF-α分泌；

           ● 微沟槽结构（5 μm groove）：促进THP-1向M2表型转化，增强CCR7、CD209表达。

（2）表面电荷（Surface Charge）：

           ● 阳离子材料（如PEI、壳聚糖）：通过TLR-4通路激活RAW 264.7向M1极化，诱导IL-12分泌；

           ● 阴离子材料（如羧甲基化纤维素）：激活THP-1向促炎表型转化。

（3）机械性能（Stiffness）：

           ● 低刚度基质（1.4-11 kPa）：促进THP-1分泌TNF-α，M1极化；

           ● 高刚度基质（>100 kPa）：诱导RAW 264.7产生ROS，但TNF-α分泌减少，呈现M2样表型。

2. 生物材料评价配套方案

巨噬细胞-材料共培养专用培养基（低内毒素<0.5 EU/mL，避免背景炎症激活）、Transwell共培养系统（用于研究材料浸提液对巨噬细胞的间接作用）及3D培养支架（评估材料拓扑结构对极化的影响）。

（1）药物筛选与干预策略

利用RAW 264.7与THP-1极化模型可进行：

           ● 天然产物抗炎活性筛选：如灵芝酸A（Ganoderic Acid A）诱导THP-1自噬与凋亡、二甲双胍（Metformin）联合氯喹增强对THP-1的细胞毒性；

           ● 纳米材料生物安全性评价：评估金纳米颗粒（5-60 nm）、TiO₂纳米颗粒（25-250 nm）等引起的巨噬细胞极化偏移；

           ● 免疫调节水凝胶开发：测试不同刚度（0.5-348 kPa）水凝胶对巨噬细胞浸润与极化的调控作用。

（2）CellFac细胞产品技术规格

（3）发货方式：

           ● 复苏发货：T25培养瓶，细胞密度80-90%，48小时恒温运输；

           ● 冻存发货：1 mL冻存管（1×10⁶细胞/支），无血清冻存液（含10% DMSO），干冰运输。

（4）实验操作关键提示

          A. RAW 264.7培养要点：

              ● 该细胞对培养基pH变化敏感，建议使用酚红-free DMEM进行炎症刺激实验，避免酚红对比色法检测（如NO检测）的干扰；

              ● 传代时避免过度消化（0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟即可），防止细胞膜损伤影响后续极化响应；

              ● 冻存复苏后前2代细胞可能呈现活化状态，建议传代至第3-4代用于实验，以获得稳定的静息表型。

          B. THP-1分化优化：

              ● PMA浓度优化至关重要，过高浓度（>100 ng/mL）导致细胞过度贴壁、分化不完全甚至凋亡；

              ● 分化后需血清静置（Resting）步骤，使用含血清培养基去除PMA残留，避免持续激活；

              ● THP-1分化后的巨噬细胞不宜连续传代，建议每次实验从冻存的M0细胞或直接从单核细胞状态重新分化，以保持实验重现性。

（5）极化效率验证：

建议每批次实验设置：

              ● 阳性对照：LPS（1 μg/mL）诱导RAW 264.7，确认iNOS上调>30倍；

              ● 阴性对照：未刺激细胞（M0）；

              ● 试剂对照：PMA-only处理的THP-1（确认无自发极化）。

巨噬细胞极化验证试剂盒（含iNOS、CD206一抗及Western Blot内参）可协助客户快速建立稳定的极化模型。

四、结语

RAW 264.7与THP-1细胞系作为免疫工程研究的基石，为生物材料免疫相容性评价、药物抗炎机制解析及组织再生免疫调控研究提供了标准化、可重复的体外平台。CellFac致力于提供经严格质控、遗传背景清晰的细胞资源与配套培养体系，助力您的免疫调节研究取得突破性进展。